依科试剂丨BCA蛋白定量试剂盒

发布时间：2026-07-29 热度：36

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   BCA 蛋白定量即Bicinchoninic Acid Assay ，是目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一。这个方法通过检测不同浓度样品

的颜色变化来判断蛋白的浓度。在碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，该络合物的产量

与蛋白浓度成正相关，可检测该水溶性复合物在波长562nm处的吸收值，并与标准回归曲线对比，根据线性回归方程即可计算出

待测蛋白的浓度。本试剂盒根据BCA法配制而成，检测浓度下限可达到25μg/mL。检测样本浓度在50-2000μg/mL浓度范围内有较

好的线性关系。

操作方法

配制BSA标准样本

标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，标准品稀释液最好和溶解蛋白的溶液相同。也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。可根据下

表配制所需的标准样本，也可根据实验需要配制标准曲线，除空白对照外最少配制六个标准样本。

配制BCA工作液

1）计算所需要的总BCA工作液体积。

总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液，比色皿检测时每个样品需要加2.0mL BCA工

作液，微孔板检测每个样品加200μL BCA工作液。

2）配制BCA工作液

BCA工作液配制比例为BCA试剂A：BCA试剂B = 50：1；即每50μL的试剂A中加入1μL的试剂B，充分混匀即为BCA工作液。

BCA试剂B液加入A液中后会出现浑浊，为正常现象，混匀后立即变澄清。

BCA工作液装入密封容器内，室温条件仅能稳定约3h，尽快进行检测。

检测方法

1. 比色皿检测法

1）取100μL标准品和待测样品取加入到反应管中。

2）每管加入2.0mL BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。

3）冷却到室温。使用分光光度计检测562nm波长出吸光度，以装满水的比色皿对仪器校零。在10分钟内对所有样品读数

（常温下BCA反应仍在进行，尽快检测以减少误差）。

4）根据BSA标准品的吸光度，绘制标准曲线（X-最终的OD562nm；Y-蛋白浓度μg/μL）。依据标准曲线和样品的稀释倍数

计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法

1）取25μL标准品和待测样品加入到微孔板中。

2）每孔加入200μL BCA工作液，可振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。

3）在酶标仪上的540-595nm波长范围内检测吸光度，其中562nm波长为最佳。

4）根据BSA标准品的吸光度，绘制标准曲线（X-最终的OD562nm；Y-蛋白浓度μg/μL）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计

算样品蛋白浓度。

注意事项

本实验需可测定波长为540-595nm之间的分光光度计一台或酶标仪一台，可检测562nm波长的最佳。

BCA法测定蛋白浓度时，OD值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在10分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。

绘制标准曲线建议使用去除背景值后的吸光值读数。

由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的个别读数可舍去。

未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

如果得到的蛋白浓度超过检测最大值，应当重新稀释样品后再次测定。